先介绍下高速离心机梯度介质的选用:
(1)盐梯度介质。
(2)小分子有机物如蔗糖。
(3)三碘化苯衍生物。
(4)有机高聚物。
(5)胶态二氧化硅。
高速离心机梯度的密度范围:
(1)速率区带离心的介质密度小于样品中各种颗粒的密度。
(2)等密度区带离心的介质密度大于样品中各种颗粒的密度。
高速离心机梯度的容量:
指在达到分离要求的前提下,梯度介质容纳样品的大数量。
(1)与样品组成和分离要求有关。
(2)与梯度总体积、斜率和介质粘度有关。
(3)与转速和转子形式有关。
高速离心机为了密度梯度和样品区带的稳定,加到密度梯度液柱部样品的密度必须小于梯度液部的密度,如果不是这样,样品将以塌陷的方式通过梯度,直到到达等密度区。高速离心机在这个过程中样品层将明显的扩展,缠上的小滴沉降会造成区带分辨力下降。
离心机可供血浆、血清、尿素及疫苗制造等离心沉淀分离用。随着分子生物学,遗传工程研究和应用的发展,离心分离技术也经历了数代更换,由低速离心机,高速离心机,超速离心机到超速冷冻离心机,超大容量冷冻离心机。
高速离心机将装有不均颗粒的离心管在台式大容量冷冻离心机中高速旋转,大小、密度不同的颗粒会以各自的沉降速率移向离心管底部。如果设计定的转速和时间,沉降速率大的先沉降到离心管底部,沉降速率中等和较小的组分继续留在上清液中。将上清液转移到另离心管中,提高转速并掌握定的时间,可获得沉降速率中等的组分。如此反复操作,可实现不同组分的分离。
高速离心机驱动系统由电机、驱动轴和减震机构等组成。采用交流变频电机,密封预润滑式驱动轴,减震机构降低了离心机工作时的振动和噪音。高速离心机制备的提副业是凹状梯度时,与凸状梯度相反,先从混合室里流到离心管的是重端梯度液,制备时,轻液要缓慢的铺上,因而要求针头以相应的速度抬起,在多数情况下,只是简单的将离心管斜放定角度,将针头烤放于离心管口,使溶液沿管壁缓缓流下,逐步铺上,加完后,再把离心管垂直放好加样。此时应注意的是,所选用高速离心机离心管的材料好是亲水性的,如是憎水性离心管,可用些盐,这样再加入梯度溶液时,可保证均匀的流下。